影響色譜柱分離度的因素是固定相的類型。性質(粒度。粒徑分布等。).填充狀態。柱長。流動相的類型和流速以及用于測量柱效的物質的性質。具體如下:

(1)色譜長度和填料性質。色譜柱越長，成分之間的分析越好，但色譜柱越長，壓降越大，輸入壓力有限。色譜柱過長會增加進出口壓力比，反而會影響色譜峰分離；

(2)色譜柱填料的粒度也是主要因素。粒子越細，由于表面積增加，分辨率越好，但顆粒細度會增加柱壓降，也會產生反作用；

(3)柱溫對液相色譜儀的分析也有很大的影響，因為氣體在液體中的溶解度或固體表面的吸附程度隨著溫度的增加而降低。

(4)在氣液色譜分析中，當超過一定溫度時，靜態液體通常會從色譜柱中揮發，所以在選擇柱溫時要考慮樣品的沸點。一般來說，N2.Ar等分子量大的氣體的優點是擴散效果小，缺點是柱內壓降大流速慢，即分析周期長；

(5)載氣流速的影響。介質在固定相上的滯留時間主要取決于介質本身的特性(揮發性、極性等。)和載氣流速。因此，流速直接影響分離度；

(6)進樣時間和進樣量的影響。進樣時間應盡可能短。原則上，瞬時進樣會增加分離度。進樣量應盡可能小，但檢測器應能識別。因此，通過增加柱長、減少進樣量、降低載氣流速、降低色譜柱溫度、提高汽化室溫度和減少系統死體積，可以實現提高色譜柱分離度。